热带青蛙馆藏的聚集性病例引起了临床、病理、组织学和微生物学发现的关注，器官样本中衣原体的存在表明，这些病原体有可能损害两栖动物的健康。必须考虑到相当非特定的行为异常，最终导致濒危两栖物种的宝贵繁殖群的丧失。
结果在动物园中，在隔离期内的第一次衣原体证明期间，在冠状树蛙中开始肠外治疗。为此，以2mg / kg SC q 5小时将恩诺沙星注射到背淋巴囊中。以用四环素治疗狐猴，Cruziohyla craspedopus和Triprion petasatus，随后由于19年6月重复检测到病原体—使用恩诺沙星。
免疫组织化学通过IHC，在动物园的Triprion spinosus组织中检测到衣原体包涵体，但在动物园的Litorea caerulea组织中未检测到衣原体包涵体。检查的四个Triprion棘之一在皮肤，肾脏和肠道中有衣原体包涵体，仅在肾脏和肺部各有一个。
在所有这些组织中，单细胞中很少存在衣原体包涵体，这些细胞很可能是巨噬细胞。阳性细胞位于皮肤表层真皮、肾肺间质以及固有层和肠粘膜下层。衣原体包涵体的存在与炎症浸润无关，但频繁进展的自溶仅允许对病变进行有限的评估。
由于衣原体DNA含量低导致循环阈值值高于30，因此只有少数样品被处理用于衣原体培养。
在SBA和Gassner琼脂上以不同强度培养一致的细菌微生物群，并使用MALDI-TOOF MS鉴定为嗜水气单胞菌，弗氏柠檬酸杆菌，摩根氏摩根氏菌，沙雷氏菌，荧光假单胞菌，粪碱性菌，吲哚菌，河流迷走球菌，但没有任何布鲁氏菌属或沙门氏菌属的特殊证据。
所有三个集合的青蛙都被发现感染了肺炎衣原体，但没有尝试明确的物种水平鉴定，或者没有在所有病例中给出有效的结果。然而，在生命内或死后样品中，每种青蛙物种至少检测到一次衣原体。
从皮肤和口腔以及粪便和尿液样本中采集的拭子获得了阳性或可疑的结果。在大多数情况下，从Ct值得出的衣原体组织负荷为中等至低。衣原体PCR结果和样品数据。
简而言之，衣原体仅通过属特异性PCR检测到，并且仅在Triprion petasatus组织中检测到。然而，来自这个持有的棘锥虫后来在动物园B中被诊断出患有肺炎衣原体。在13/2016年期间尸检的动物园A的所有2017只怀特树蛙中，肺炎衣原体感染在粪便检查，皮肤拭子或器官样本中被诊断出来。
值得注意的是，在接下来的几年中，除一种可疑的皮肤拭子外，所有对拭子样本或尸检动物的衣原体检测均呈阴性。同样，在动物园B隔离的Triprion spinosus组中的五分之四的动物在死后样本中显示出衣原体阳性结果。
在来自棘锥虫的一个样本中，对16S rRNA基因的一部分进行扩增和测序。序列比对显示与存放在GenBank中的肺炎衣原体99S rRNA基因序列的相似性为38.100-16%。
在系统发育分析中，该序列与来自不同来源的其他肺炎衣原体序列形成一个簇，而从其他两栖动物获得的其他衣原体物种聚集在另一个分支中。
讨论在过去的30年中，许多研究试图阐明衣原体感染在两栖动物中的作用。大多数病例涉及青蛙的主要两栖目，但蝾螈也易感，而蝙蝠目目的证据仍然缺失。除了几种伴有全身感染的急性群体性死亡事件外，还描述了涉及中枢神经系统或肺部的局部和慢性形式。
一些两栖动物被发现无症状感染衣原体。通过PCR或IHC检测衣原体与特定的形态学发现无关。在某些情况下，形态改变归因于其他因素，例如寄生虫病。然而，两栖动物衣原体病的临床或严重病理体征通常不是典型的。
有趣的是，一项针对健康蝾螈的皮肤微生物组研究将衣原体检测为第四大主要系统型，并显示它占整个群落的 24.3%。在蝾螈皮肤中也发现了有效的抗衣原体皮肤素。它们对沙眼衣原体非常有效，减少了包涵体形成单位的数量并阻断体外的新感染。
尽管感染确实发生在野外，这可能表明在自然条件下存在一种微调的平衡机制。环境或维持环境和辅助因素是否以及在多大程度上影响两栖衣原体病和无症状衣原体感染的临床结果，以及这些因素是否有助于微生物作为专性或兼性病原体的作用，仍有待确定。
之前的所有研究都仅在尸检后才发现衣原体，但是例如在爬行动物中，并且从当前研究的皮肤，口腔，粪便和尿液样本中获得—两栖动物也可以进行维生素内诊断。不幸的是，不可能在所有病例中在物种水平上正确识别所涉及的衣原体，因为组织材料没有储存在回顾性病例中。
同样，在其他情况下，组织样品中的细菌载量可能太低，其中细胞培养物中的扩增或分离不成功。人们很容易推测，同一设施内的感染系列是由相同的衣原体物种引起的。肺炎衣原体过去一直是两栖动物和爬行动物中的主要衣原体物种。
这种病原体通常在人类中发现，大多数成年人在其一生中至少感染一次肺炎衣原体。其他易感宿主物种是反刍动物、猪、马、考拉和爬行动物。可能，两栖动物中衣原体物种的光谱就像爬行动物一样，比迄今为止已知的更多样化。
还有其他系统发育相关的、最近描述的爬行动物类群，如 C. serpentis 和念珠菌 C. testudinis、C. corallus 和 C. sanzinia 代表不可培养或难以培养的衣原体。 在这方面，本报告阐明了对两栖动物衣原体进行例行检测的重要性。
观察到嗜睡、厌食、腹胀以及皮肤褪色和脱落等临床症状，但一种非常罕见的行为是在进食后2天内反流，以前只有一次描述过爬行动物。在青蛙经常失去活力，停止叫唤和繁殖，并表现出慢性消瘦状态，直到几个月后死亡。
尸检时身体状况不佳，伴有脂肪体缺失和肠道空虚是典型的，之前已经描述过。为了改善健康状况，已经在这里提到的一些两栖动物物种群中实施了几种抗菌治疗方案。为了避免日常处理每只青蛙的压力，选择了不同药物的沐浴治疗。
这种看似方便的抗菌剂应用有一些陷阱，因为不同物种的药代动力学和药效学在很大程度上是未知的，大多数青蛙倾向于离开水处理的身体。因此，使用用于繁殖的雨水系统，延长接触时间，以确保药物通过皮肤和膀胱壁充分吸收。
然而，所有尝试的治疗都没有成功，因为临床症状没有改善，衣原体仍然被检测到。治疗方案的描述很少包含在发表的关于两栖动物衣原体病的论文中。
Staub及其同事发现他们的C. serpentis和C. poikilothermis的爬行动物分离株对温度敏感，并且在体外对四环素和莫西沙星敏感，但对阿奇霉素耐药中等。同样，治疗不成功或与长期神经功能缺损有关，因此容纳受感染动物的水箱数量减少被用来控制疾病。
Rüegg等人报告了每天肌内注射马博沙星治疗七条衣原体病蛇长达35天，一方面可以显示通过阴性PCR确认的成功治疗，但另一方面，一条损失和一条治疗抵抗蛇表明通常需要实施更安全，更有效的治疗方案。
以前的研究已经使用了大量的方法来诊断两栖动物衣原体感染。在我们的病例系列研究中，衣原体培养不成功，这可能是由于感染的多重性低引起的，可能是由于慢性状态或使用不充分的细胞系和培养条件。Ct值高于32被认为是培养结果不足的指标。
衣原体在暴露于不利条件下时容易进入细胞内持久性阶段，导致保持可行但不可培养的状态，也可以将其称为“休眠”状态。这可以解释抗菌治疗和体外培养不成功的原因。
因此，据报道，动物在较长时间内持续感染并保持无症状携带者状态，导致持续性、无症状或症状轻微的慢性感染。由于衣原体病发病机制中的组织损伤，这些感染具有长期消耗性疾病的特征。由于“停滞”衣原体复制和增殖的这些独特特征，检测灵敏度会降低。
有趣的是，特别是对源自poikilothermomic动物的衣原体的ompA和其他基因的进一步分析表明，与人类呼吸和心血管疾病相关的衣原体序列高度相似甚至相同。
同时，随着更深入的基于全基因组测序的技术的出现，越来越多的证据表明，人类肺炎衣原体菌株曾经是人畜共患病的获得，并且可能是从变温动物进化而来的，导致人类适应衣原体独立于动物宿主。
根据来自人类和动物的30种肺炎衣原体菌株的多基因分析，得出结论，它们属于五种基因型，其中基因型A，B和C与青蛙有关。假设两栖动物的基底分支分离进化为最初感染爬行动物宿主，现在代表了人类感染的主要克隆谱系。
有趣的是，已经确定了第二种谱系与两栖动物分离株作为起点，进化成两个亚谱系，一个感染澳大利亚有袋动物，而另一个分支再次跨越动物—人类屏障感染澳大利亚原住民。WGS分析可以获得类似的结果。
结论目的是提高对两栖动物，特别是青蛙衣原体感染的认识，并建议在常规诊断中进行有针对性的分析。在衣原体属中，特别是肺炎衣原体，也是迄今为止尚未分类的物种在两栖传染病的鉴别诊断中必须考虑的。
因此，观察到不孕症和慢性消瘦的临床症状以及病理发现与青蛙衣原体生物引起的感染之间存在关联。只有在衣原体被确认为致病病原体时才应开始治疗，因为目前的治疗方案由于这种病原体可能持续存在而导致预后不良。
尽管肺炎衣原体被认为是具有高度种内遗传相似性的“单形性病原体”，并且经常观察到人与人之间的感染，但来自两栖动物的肺炎衣原体分离株似乎没有明显的人畜共患潜力。
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